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方法:
一.濾光片波長(cháng)精度檢查及其峰值測定
方法及其衡量的標準:用高精度紫外可見(jiàn)分光光度計(波長(cháng)精度±0.3nm)對不同波長(cháng)的濾光片進(jìn)行光譜掃描,檢測值與標定值之差即為濾光片波長(cháng)精度,其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好,波長(cháng)精度越高。
二.靈敏度和準確度的監測
方法:①靈敏度:精確配制6ug/ml重鉻酸鉀(干燥)溶液(0.05mo1/L硫酸溶解),加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中,以0.05mo1/L硫酸溶液作空白,于450nm(參比波長(cháng)650nm)測定,其吸光度應≥0.01A。②準確度:準確配制:1mmo/L對硝基苯酚(提純品)水溶液,然后以10mmo1/L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之,加入200ul稀釋液于小孔杯中,以10mmo1/LNaOH溶液作空白,于405nm(參比波長(cháng)650nm)檢測,其吸光度應在0.4A(0.395~0.408A)左右。
三.通道差與孔間差檢測
方法及其表達方式:①通道差檢測:取一只酶標板小孔杯(杯底須光滑、透明、無(wú)劃痕、無(wú)污染)以酶標板架作載體,分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200u*后置于8個(gè)通道的相應位置,蒸餾水調零,采用雙波長(cháng)(測定波長(cháng)490nm,參比波長(cháng)630或650nm,以下均相同)連續測三次,觀(guān)察其不同通道之間測量結果的一致性可用極差值來(lái)表示其通道差。②孔間差的測量:選擇同一廠(chǎng)家、同一批號酶標板條(8條共96孔)分別加入200ul甲基橙溶液(吸光度調0.065~0.070A)先后置于同一通道,蒸餾水調零,采用雙波長(cháng)檢測,其誤差大小用±1.96s衡量。
四.零點(diǎn)飄移
方法:取八只小孔杯,分別置于八個(gè)通道的相應位置,均加入200ul蒸餾水并調零,采用雙波長(cháng)或單波長(cháng)(490nm)每隔30min測定一次,觀(guān)察8個(gè)通道4h內的吸光度變化。其與零點(diǎn)的差值即為零點(diǎn)飄移。
五.精密度評價(jià)
方法及評價(jià)指標:每個(gè)通道三只小杯,分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液,蒸餾水調零,采用雙波長(cháng)作雙份平行測定,每日測定兩次,連續測定20天。分別計算其批內精密度、日內批間精密度、日間精密度和總精密度及相應的CV值。
六.線(xiàn)性測定
方法:精確稱(chēng)取甲基橙配制5個(gè)系列濃度的溶液,采用雙波長(cháng)平行檢測8次求其均值。計算回歸方程、相關(guān)系數r及標準估計誤差Sy,x,并用±1.96Sy,x表示樣品的95%測量范圍。
七.雙波長(cháng)評價(jià)
方法:在運用酶標儀檢測樣品時(shí),由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等,這些都是儀器測定過(guò)程中常見(jiàn)的干擾因素,而標本中的干擾組份(如溶血、黃道)因洗滌而對測定結果影響則較小,因此我們將文獻中的雙被長(cháng)評價(jià)方法改為:取同一廠(chǎng)、同一批號酶標板條(每個(gè)通道2條共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度調0.065~0.070A)先后于8個(gè)通道分別采用單波長(cháng)(490nm)和雙波長(cháng)(測定波長(cháng)490nm、參比波長(cháng)630/650nm)進(jìn)行檢測,計算單波長(cháng)和雙波長(cháng)測定結果的均值、離散度,比較各組之間是否具有統計學(xué)差異以考察雙波長(cháng)清除干擾因素的效果。