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一、酶標儀和分光光度計的三大差別
酶標儀即酶聯(lián)免疫檢測儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗的儀器又稱(chēng)微孔板檢測器??珊?jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類(lèi),但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計,即用比色法來(lái)進(jìn)行分析。測定一般要求測試液的終體積在250μL以下,用一般光電比色計無(wú)法完成測試,因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。
分光光度計,又稱(chēng)光譜,是將成分復雜的光分解為光譜線(xiàn)的科學(xué)儀器。測量范圍一般包括波長(cháng)范圍為380~780 nm的可見(jiàn)光區和波長(cháng)范圍為200~380 nm的紫外光區。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。
同為,實(shí)驗室內測定吸光度的儀器,酶標儀和分光光度計存在一些不同之處,具體差別體現在以下三個(gè)方面:
(1)盛裝待測溶液的容器:
分光光度計用的是比色皿,酶標儀使用的是塑料微孔板(酶標板)。比色皿只能起到盛裝溶液的作用,每個(gè)比色皿一次只能盛裝一種溶液。酶標板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強的吸附作用,因此用它作為固相載體,酶標板通常為48孔或96孔,每個(gè)微孔可以盛裝不同的溶液。
(2)光路的方向:
分光光度計是水平光路,而酶標儀則是垂直光路。由于酶標板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線(xiàn)只能垂直穿過(guò),因此酶標儀的光束都是垂直通過(guò)待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過(guò)比色液。垂直光的特點(diǎn)是標本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
(3)光路的長(cháng)度:
由于光密度(OD值)與吸光系數, 待測組分的濃度以及光路長(cháng)度成正比關(guān)系。
分光光度計采用的比色杯的寬度通常是1cm,所以光路長(cháng)度固定為1cm。因此不同儀器,不同批次測量的數據具有同樣的可比性。
而酶標儀采用的是垂直光路, 所以光路的長(cháng)度應該是液體液面的高度。所以測得的值受到樣品的體積的影響。
二、酶標儀和分光光度計的優(yōu)缺點(diǎn)比較
分光光度計:
優(yōu)點(diǎn):1、檢測波長(cháng)范圍較寬;2、加樣量不一致對測量結果沒(méi)有影響。
缺點(diǎn):1、工作量大,操作繁瑣,耗時(shí);2、耗試劑;3、結果穩定性差,重復性較差,誤差較大;4、對于微量物質(zhì),難以檢測到。
主要應用領(lǐng)域:藥品檢驗、藥物分析、環(huán)境檢測、衛生防疫食品、化工、科研等領(lǐng)域對物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。
酶標儀:
優(yōu)點(diǎn):1、一次性處理樣品量大,省時(shí);2、樣本、試劑用量少;3、操作簡(jiǎn)單,重復性好,檢測速度快、效率高。
缺點(diǎn):1、酶標儀96孔板在紫外光區有較強的紫外吸收,應盡量避免在300nm以下使用酶標儀進(jìn)行含量測定;2、必須確保微孔板每個(gè)孔加樣量嚴格一致,對實(shí)驗者的操作技能提出了更高的要求。
主要應用領(lǐng)域:臨床檢驗、生物學(xué)研究、農業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)等。