酶標儀時(shí)間分辨熒光技術(shù)是以鑭系元素作為標記物的一種免疫檢測技術(shù)。其原理是鑭系元素(如Eu3+)具有長(cháng)壽命的發(fā)射熒光，標記待檢測物質(zhì)后，使用特定激發(fā)光激發(fā)，通過(guò)一定的檢測時(shí)間延遲來(lái)達到扣除本底熒光的目的，并以此來(lái)提高信噪比與檢測靈敏度。

時(shí)間分辨熒光（精度：10-18mol/L）與以下標記免疫技術(shù)相比：

優(yōu)點(diǎn)：精度高

放射免疫（精度：10-12mol/L）早出現，發(fā)展成熟穩定性差，有危害，操作繁瑣

酶聯(lián)免疫（精度：10-9mol/L）安全靈敏度、重復性差

化學(xué)發(fā)光（精度：10-15mol/L）測定速度快、靈敏度高樣品不能重復測定試劑穩定性差，試劑價(jià)格高

電化學(xué)發(fā)光（精度：10-17mol/L）本底較小、靈敏度較高非開(kāi)放性試劑系統、不能做科研價(jià)格高

90年代以來(lái)，時(shí)間分辨熒光分析技術(shù)因其靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，標準曲線(xiàn)范圍寬，不受樣品自然熒光干擾，無(wú)放射性污染等特點(diǎn)，其方法學(xué)研究和臨床應用的發(fā)展十分迅速。

用三價(jià)稀土離子及其螯合物作為示蹤物，標記抗原、抗體、激素、核酸探針等物質(zhì)

當反應體系發(fā)生后，如抗原抗體免疫反應、核酸探針雜交等反應，經(jīng)解離—增強作用，用時(shí)間分辨熒光儀，測定后產(chǎn)物的熒光強度。

根據熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應體系中分析物的濃度，達到定量分析的目的.。

常規熒光免疫測定技術(shù)易受待測樣品中非特異本底熒光的干擾，靈敏度受到一定限制。于是，20世紀80年代初，在常規熒光免疫分析的基礎上發(fā)展了一種新型免疫分析技術(shù)——時(shí)間分辨熒光免疫測定(time-resolvedfluoroimmunoassay，TRFIA)。其原理和方法與常規熒光免疫不同，所用標記物不是普通熒光物質(zhì)，而是鑭系稀土元素銪(Eu3+)、釤(Sm3+)、鋱(Tb3+)等[8]，檢測設備也不同于一般的熒光分光光度計，而是使用時(shí)間分辨熒光計測量排除樣品中非特異熒光的干擾，極大地提高了測定方法的靈敏度[9]。TRFIA在靈敏度、特異性、穩定性及測量自動(dòng)化程度等方面都可與放射免疫測定(RIA)相媲美，而其標準曲線(xiàn)范圍寬(跨越4—5個(gè)數量級)，小檢出值可達10—18mol／L，分析速度快，遠遠超過(guò)RIA、EM及發(fā)光免疫測定，并具操作簡(jiǎn)便，無(wú)放射性污染，因此成為免疫分析中具發(fā)展潛力的一項技術(shù)[10]。TRFIA的基本原理是：將鑭系元素銪(Eu3+)、釤(Sm3+)、鋱(Tb3+)等通過(guò)具有雙功能基團的螯合劑標記于抗體(或抗原)分子上。當標記抗體和待測抗原結合，采用紫外脈沖光(340nm，每秒閃爍1000次)進(jìn)行激發(fā)，不僅發(fā)射出高強度的熒光(613nm)，而且衰變時(shí)間也較長(cháng)(10～1000us)。利用延緩測量時(shí)間，待短壽的本底熒光(樣品池和待測樣品中蛋白質(zhì)等自然發(fā)生的非特異性熒光，衰變時(shí)間1—10ns)全部衰變后，再行測量，所得信號*為長(cháng)壽命鑭系元素螯合物的特異熒光，從而有效排除非特異本底熒光的干擾，大大提高分析的特異性和靈敏度。此外，Eu3+或Sm3+的激發(fā)光與發(fā)射光之間有很大的Stokes位移，而且激發(fā)光的光譜較寬，有利于增高激發(fā)能，增強標記物的比活性；且發(fā)射熒光的譜帶很窄，有助于降低本底，從而提高分析的特異性和靈敏度。