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企業(yè)動(dòng)態(tài)
酶標儀在鈣離子通道檢測方面主要有兩種方式
更新時(shí)間:2016-10-27 點(diǎn)擊次數:5288次
酶標儀應用廣泛,酶標儀主要功能模塊熒光與化學(xué)發(fā)光模塊可實(shí)現對細胞中鈣離子通道的檢測。
生物膜離子通道是各種無(wú)機離子跨膜運動(dòng)被動(dòng)運輸的通路。生物膜上無(wú)機離子出入細胞的方式有被動(dòng)運輸(順離子濃度)與主動(dòng)運輸(逆離子濃度)。其中被動(dòng)運輸的通路被稱(chēng)為離子通道。Ca2+通道廣泛存在于各種生物組織的細胞膜中。藥物對Ca2+通道的作用可分為:①通道阻斷或抑制劑,可分為苯烷基胺類(lèi)(如異博定、甲基異博定D600)、苯硫氮?類(lèi)、雙氫吡啶類(lèi)等類(lèi)型。②通道激活劑,一些雙氫吡啶化合物如BayK8644等藥物可活化Ca2+通道。鈣離子通道定義:它是一種跨越細胞膜的結構,它嚴格控制著(zhù)鈣離子進(jìn)入細胞的過(guò)程。由于鈣離子信號與很多重要生理功能相關(guān),例如心臟收縮、基因轉錄等,因此調節鈣離子進(jìn)入細胞的反饋機制就關(guān)重要。
酶標儀用于檢測鈣離子通路主要通過(guò)兩種方式:1,熒光法?;衔锱c細胞膜上離子通道結合后,改變離子通道狀態(tài),通道打開(kāi),鈣離子進(jìn)入細胞。進(jìn)入細胞后與細胞內鈣離子熒光指示劑結合,發(fā)出熒光后酶標儀捕獲,熒光強度與進(jìn)入細胞的鈣離子含量成正比。熒光指示劑多用FLuo3,Fluo3-AM是一種可以乙酰甲酯衍生物,可以穿透細胞膜進(jìn)入細胞,進(jìn)入細胞后被細胞內的酯酶剪切成FLuo3并滯留在細胞內,鈣離子進(jìn)入細胞后與之結合,會(huì )發(fā)出較強的熒光。
2,發(fā)光法。水母發(fā)光蛋白復合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔腸素組成。只有當鈣離子(Ca2+)與該復合物結合后,腔腸素才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide,同時(shí)釋放出CO2和藍色熒光(——466 nm)。正是此Ca2+依賴(lài)性的反應過(guò)程(見(jiàn)圖1),使得腔腸素非常適用于監測活細胞內鈣離子水平。與常規的熒光鈣離子指示劑相比,其主要具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn),1)能檢測較大范圍的鈣濃度 – 從0.1 μM >100μM;2)樣品無(wú)自體熒光,背景熒光低于使用熒光鈣離子指示劑;雖然信號比使用熒光鈣離子指示劑弱,但是通過(guò)成像儀器可以得到更高的信噪比,因此具有更高的靈敏度。3)水母發(fā)光蛋白復合體能夠穩定維持在細胞內,使其能夠進(jìn)行數小時(shí)數天的鈣離子監測。
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